جداسازی و بررسی خصوصیات مولکول هایscFv ضد HER۲ با استفاده از تکنولوژی نمایش فاژی جهت تشخیص سرطان پستان

مقدمه: scFv ها، فرم هایی از آنتی بادی های نوترکیب می باشند که با استفاده از روش های پیشرفته بیولوژی مولکولی و مهندسی ژنتیک ساخته می شوند. همچنین آنتی ژن HER۲ هدف مناسبی برای طیف گسترده ای از سرطان ها می باشد. مطالعه حاضر با هدف جداسازی scFv آنتی بادی های اختصاصی انجام شد. روش کار: به منظور جداسازی قطعات scFv های اختصاصی علیه قسمت خارج سلولی HER۲ کوت شده در ایمونوتیوب، تکنولوژی نمایش فاژی با استفاده از کتابخانه فاژی صورت گرفت. scFv آنتی بادی های به دست آمده در سویه TG۱ از باکتری اشرشیاکلی بیان شدند. محصولات نوترکیب با استفاده از ستون های کروماتوگرافی تمایلی بر علیه His-tag خالص سازی شدند. خصوصیات اتصالی قطعات scFv به دست آمده علیه آنتی ژن HER۲ با استفاده از آزمون های وسترن بلات، بیوسنسوری و فلوسایتومتری بررسی شدند. یافته ها: پس از سه مرحله گزینش علیه آنتی ژن HER۲، سه کلون scFv به دست آمد که نتایج توالی یابی DNA اختصاصیت آنها را تایید نمود. نتایج بررسی کنتیکی بیوسنسور نشان داد که همه scFv آنتی بادی های جدا شده علیه قسمت خارج سلولی آنتی ژن HER۲ تمایل اتصال با اپی توپ های شناخته شده بر روی سطح آنتی ژن را در دامنه مایکرومولار تا نانومولار دارند. نتایج وسترن بلات و فلوسایتومتری نیز اختصاصیت میل اتصال scFv ها با آنتی ژن HER۲ را اثبات کردند. نتیجه گیری: تکنیک نمایش فاژی یک ابزار قدرتمند برای جداسازی scFv آنتی بادی های متصل شونده اختصاصی با گیرنده HER۲ است که به عنوان آنتی ژن سطحی سرطان پستان شناخته می شود.

کلیدواژه ها:

تکنیک های بیوسنسور ، فلوسایتومتری ، گیرنده HER۲ ، مهندسی آنتی بادی ، نمایش فاژی