اتصال توالی های ژنی کدکننده ی نواحی اپی توپی پروتئین های غیرساختاری ویروس تب برفکی به روش OE-PCR یک مرحله ای
- سال انتشار: 1401
- محل انتشار: فصلنامه بیوتکنولوژی کشاورزی، دوره: 14، شماره: 2
- کد COI اختصاصی: JR_JOAGK-14-2_005
- زبان مقاله: فارسی
- تعداد مشاهده: 171
نویسندگان
گروه علوم سلولی و مولکولی، دانشگاه خوارزمی کرج
بخش تحقیق و تولید واکسن های بی هوازی، موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی، کرج
موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی، کرج
بخش تحقیق و تولید واکسن های باکتریایی بی هوازی، موسسهی تحقیقات واکسن و سرمسازی رازی، سازمان تحقیقات، ترویج و آموزش کشاورزی، کرج، ایران
چکیده
هدف: تب برفکی یک بیماری بسیار ویرانگر در حیوانات زوج سم می باشد که خسارات اقتصادی گسترده ای در صنعت دامپروری ایجاد می کند. اخیرا روش های تشخیصی این بیماری برای ردیابی آنتی بادی های علیه پروتئین های غیرساختاری ویروس تب برفکی بسیار توسعه یافته اند. پروتئین های غیرساختاری ۳ABC و ۳D که ارائه دهنده ی اپی توپ های خطی سلول های B هستند، تشخیص موثر دام های آلوده به ویروس را امکان پذیر می کنند. در این تحقیق، اپی توپ های خطی ایمنی زای غالب از پروتئین های ۳ABD برای طراحی ساخت توالی ژنی جدید و اتصال قطعات ۳AB و ۳D در نظر گرفته شد. مواد و روش ها: از تکنیک گسترش نواحی همپوشان به کمک واکنش زنجیره ای پلیمراز (OE-PCR) برای سنتز توالی ۳ABD آنتی ژنی استفاده شد. RNA ویروسی از سلول های BHK آلوده به ویروس جداسازی و رونویسی معکوس شد. برای حذف توالی میانی ۶۵۴ نوکلئوتیدی ژن۳C ، یک جفت آغازگر داخلی با ۲۹ نوکلئوتید همپوشان و یک جفت آغازگر خارجی طراحی شدند. قطعات ۳AB و ۳D هرکدام در واکنش های جداگانه ی PCR تکثیر شدند و پس از الکتروفورز از ژل تخلیص شدند. این قطعات به عنوان الگو در OE-PCR برای سنتز توالی ۳ABD به کمک آغازگرهای خارجی و آنزیم Pfu پلیمراز در یک واکنش یک مرحله ای مورداستفاده قرار گرفتند. نتایج: نتایج این مطالعه نشان داد که هرکدام از قطعات ۳AB (۴۱۸ جفت باز) و ۳D (۵۵۷ جفت باز) با توالی های همپوشان به ترتیب در انتهای '۳ و '۵ تکثیر شدند. OE-PCR منجر به تکثیر چندین قطعه شد و قطعه ی ۳ABD با طول موردنظر (۹۴۶ جفت باز) پس از توالی یابی تایید شد. تنها با در نظر گرفتن ۲۹ جفت باز همولوژی در طراحی آغازگرهای همپوشان و یک آنزیم پلیمراز با دقت بالا، دو ناحیه ی اپی توپی از پروتئین های غیرساختاری ویروس تب برفکی (۳’-۳AB و ۵’-۳D) به هم متصل شدند. نتیجه گیری: توالی ژنی ساخته شده به روش OE-PCR یک مرحله ای، علاوه براین که نواحی آنتی ژنی پروتئین های غیرساختاری ۳ABD ویروس تب برفکی را دارا می باشد، مشکلات مربوط به هزینه ی بالای سنتز پپتید را ندارد و می تواند گزینه ی مناسبی برای تولید پروتئین نوترکیب و بررسی امکان استفاده در تشخیص بیماری تب برفکی به روش الایزا باشد.کلیدواژه ها
آغازگرهای همپوشان, اپی توپ های سلول های B, جهش زایی هدفمند, گسترش نواحی همپوشاناطلاعات بیشتر در مورد COI
COI مخفف عبارت CIVILICA Object Identifier به معنی شناسه سیویلیکا برای اسناد است. COI کدی است که مطابق محل انتشار، به مقالات کنفرانسها و ژورنالهای داخل کشور به هنگام نمایه سازی بر روی پایگاه استنادی سیویلیکا اختصاص می یابد.
کد COI به مفهوم کد ملی اسناد نمایه شده در سیویلیکا است و کدی یکتا و ثابت است و به همین دلیل همواره قابلیت استناد و پیگیری دارد.