مریم دوست محمدی - دانشجوی کارشناسی ارشد مهندسی بیوتکنولوژی کشاورزی
الهام طالبی - دانشجوی کارشناسی ارشد مهندسی بیوتکنولوژی کشاورزی
مینا دادگر - دانشجوی کارشناسی ارشد مهندسی بیوتکنولوژی کشاورزی
جعفر ذوالعلی - دانشیار بخش مهندسی بیوتکنولوژی کشاورزی، دانشگاه شهید باهنر کرمان
شهرام پورسیدی - دانشیار بخش مهندسی بیوتکنولوژی کشاورزی، دانشگاه شهید باهنر کرمان

یکی از نسخه های اصلاح شده پروتئین گزارشگر فلورسنت سبز (GFP)، پروتئین mGFP۵-ER است. در این تحقیق همسانهسازی، انتقال و بیان ژن گزارشگر mgfp۵-ER در گیاه توتون انجام شد. توالی کد کننده پروتئین mGFP۵-ER در ناقل بیانگیاهی pBI۱۲۱ تحت کنترل پیش برنده CaMV ۳۵S و خاتمه دهنده nos همسانه سازی شد. سازه ی تهیه شده pBI-mgfp۵-ER با استفاده از روش ذوب و انجماد به آگروباکتریوم تومفاشینس سویه ی GV۳۸۵۰ انتقال داده شد و با استفاده ازروش دیسک برگی بر گیاه توتون تاثیر داده شد. انتخاب اولیه سلول های تراریخته گیاه توتون بر روی محیط کشت حاویکانامایسین انجام شد. نتایج واکنش زنجیره ای پلیمراز با استفاده از آغازگرهای اختصاصی برروی DNA ژنومی گیاهانتراریخته و همچنین مشاهده سیگنال فلورسانس mGFP۵-ER در برگ های گیاهان تراریخته نسل (T(۱ تحت تابش نور فرابنفش۵۶۳ نانومتر، مبین انتقال و بیان موفق پروتئین گزارشگر ترشحی mGFP۵-ER در گیاهان توتون تراریخته بود. از این سازه میتوان برای بهینه سازی روش تراریزش با هدف تولید پروتئین های نوترکیب ترشحی، هدایت بیان پروتئین های هدف به سمتمسیر ترشحی، و مقایسه کارایی سیگنال های مختلف برای هدایت جایگیری یک پروتئین نوترکیب در سیستم گیاهی استفاده کرد.

آگروباکتریوم، انتقال ژن، بیان ترشحی، پروتئین فلورسنت سبز