مقایسه روش های مختلف (میکروبی، آنزیمی ومولکولی) تشخیص آلودگی مایکوپلاسمایی در رده های سلولی انسانی و حیوانی ذخیره شده در بانک سلولی انستیتو پاستور ایران

  • سال انتشار: 1391
  • محل انتشار: مجله تازه های بیوتکنولوژی سلولی – مولکولی، دوره: 3، شماره: 9
  • کد COI اختصاصی: JR_NCMBJ-3-9_004
  • زبان مقاله: فارسی
  • تعداد مشاهده: 138
دانلود فایل این مقاله

نویسندگان

وحید ملا کاظمی ها

Department of Microbiology, Science Faculty, Science and Research Branch, Islamic Azad University, Arak , Iran.

رضا مهدیان

Molecular Medicine group, Department of Biotechnology, Pasteur Institute of Iran, Tehran,Iran.

آرش معمارنژادیان

Department of Hepatitis and AIDS, Pasteur Institute of Iran, Tehran,Iran

محمد علی شکر گزار

Department of National Cell Bank of Iran, Pasteur Institute of Iran, Tehran,Iran

حمیدرضا مهاجرانی

Department of Microbiology, Science Faculty, Islamic Azad University, Arak, Iran

امیر امان زاده

Department of National Cell Bank of Iran, Pasteur Institute of Iran,Tehran,Iran

شهرام آذری

Department of National Cell Bank of Iran, Pasteur Institute of Iran,Tehran,Iran

چکیده

اهداف و سابقه: آلودگی مایکوپلاسما در کشت سلول از مشکلات جدی در تولید فرآورده های بیولوژیک محسوب می شود. هدف ما در این پژوهش انتخاب بهترین روش استاندارد به عنوان روشی سریع با حساسیت و اختصاصیت و دقت بالا برای تشخیص آلودگی مایکوپلاسما در کشت های سلولی بانک سلولی ایران می باشد. مواد و روش ها: در این پژوهش۴۰ رده ی سلولی مشکوک به آلودگی مایکوپلاسما توسط سه روش کشت میکروبی، آنزیمی و مولکولی مورد مطالعه واقع گردیدند. ارزیابی آنزیمی به کمک کیت mycoalert انجام شد و در روش مولکولی از پرایمر یونیورسال طراحی شده بر مبنای سکانس های ثابت و مشترک موجود در SrRNA ۱۶ ریبوزومی استفاده گردید. یافته ها: درصد آلودگی مایکوپلاسمایی در کشت های سلولی با روش های مولکولی، آنزیمی و میکروبی به ترتیب با ۵/۵۷% و ۵/۵۲% و ۴۰% استحصال گردید.نتایج حکایت از تایید حساسیت، ویژگی و صحت(دقت) بالای ارزیابی مولکولی واکنش های زنجیره ای پلیمراز ( PCR ) در مقایسه با دو روش آنزیمی و کشت میکروبی دارد. نتیجه گیری: سنجش PCR بر مبنای سکانس های ثابت و مشترک موجود در SrRNA ۱۶ ری بوزومی، تکنیکی ارزشمند ، مفید و قابل اعتماد با حساسیت ، اختصاصیت و دقت بالا جهت شناسایی آلودگی های مایکوپلاسمایی در کشت های سلولی و سایر فرآورده های بیولوژیک می باشد. تکنیک آنزیمی mycoalert با توجه به حساسیت ،ویژگی و سرعت بالای آن در تشخیص آلودگی مایکوپلاسمایی (کمتر از ۲۰ دقیقه) بعد از PCR ، می تواند جایگزین روش های کشت میکروبی و رنگ آمیزی DNA فلوئوروکروم گردد.

کلیدواژه ها

Cell Culture, Mycoplasma Contamination, Human-Animal Cell Lines, کشت سلولی ،آلودگی مایکوپلاسمایی، رده های سلولی انسانی- حیوانی

اطلاعات بیشتر در مورد COI

COI مخفف عبارت CIVILICA Object Identifier به معنی شناسه سیویلیکا برای اسناد است. COI کدی است که مطابق محل انتشار، به مقالات کنفرانسها و ژورنالهای داخل کشور به هنگام نمایه سازی بر روی پایگاه استنادی سیویلیکا اختصاص می یابد.

کد COI به مفهوم کد ملی اسناد نمایه شده در سیویلیکا است و کدی یکتا و ثابت است و به همین دلیل همواره قابلیت استناد و پیگیری دارد.