سولماز خلیق فرد - Department of Biology, Faculty of Sciences, Science and Research Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran
مژگان بنده پور - Department of Biology, Faculty of Medicine, Shahid Beheshti, University of Medical Sciences
وحید رضا یاسایی - Genomic Research Center, Faculty of Medicine, Shahid Beheshti University of Medical Sciences
کاظم پریور - Department of Biology, Faculty of Sciences, Science and Research Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran
بهرام کاظمی - Cellular & Molecular Research Center, Faculty of Medicine, Shahid Beheshti University of Medical Sciences

اهداف: آنزیم I CEL یک گلیکوپروتئین گیاهی است که از گیاهان دسته کرفس استخراج می شود و اولین آنزیم یوکاریوتی است که پیوند ناجور را با یک اختصاصیت بالا در یکی از دو رشته DNA برش می دهد. هدف از این پژوهش کلون کردن ژن، بیان و تخلیص آنزیم CEL I اندونوکلئاز و بررسی عملکرد آن بر روی ژنهای جهش یافته در محیط آزمایشگاهی بوده است. مواد و روش ها: در این تحقیق از گیاه کرفس mRNA استخراج شد و سپس RT-PCR صورت گرفت و محصول به عنوان الگودر تکثیر PCR مورد استفاده قرار گرفت. ژن در پلاسمید بیانی pET۳۲a ساب کلون شد و درون باکتری E.coli سویه BL۲I( DE۳) plysS ترانسفورم گردید. پروموتور ژن با IPTG القا شد و با وسترن بلاتینگ مورد بررسی قرار گرفت. پروتئین با ستون کروماتوگرافی تمایلی ( S.Tag / His.Tag ) تخلیص شد. همچنین فعالیت اندونوکلئازی آنزیم روی محصول PCR ژن جهش یافته و نرمال در حال بررسی می باشد. یافته ها: کلونینگ ژن با موفقیت انجام شد، پروتئین نوترکیب تخلیص شد و نتایج اولیه نشان دادند که آنزیم می تواند نواحی هترودوبلکس ژن را شناسایی کند. نتیجه گیری: آنزیم CEL I نوترکیب می تواند نواحی هترودوبلکس راشناسایی نماید.

CELI endonuclease enzymes, western blotting, plasmid pET۳۲a, recombinant proteins, affinity chromatography, آنزیم CELI اندونوکلئاز، ،وسترن بلاتینگ، پلاسمید pET۳۲a ، پروتئین نوترکیب، کروماتوگرافی تمایلی