سکانس کامل سویه IR Clone۱۲ مشتق شده از سویه لاسوتا ویروس نیوکاسل موسسه رازی به روش کلونینگ
- سال انتشار: 1400
- محل انتشار: فصلنامه تحقیقات دامپزشکی و فرآورده های بیولوژیک، دوره: 34، شماره: 4
- کد COI اختصاصی: JR_VTJ-34-4_010
- زبان مقاله: فارسی
- تعداد مشاهده: 198
نویسندگان
موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی، کرج، ایران
موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی، کرج، ایران
موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی، کرج، ایران
موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی، کرج، ایران
موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی، کرج، ایران
موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی، کرج، ایران
چکیده
در چند سال اخیر بیماری نیوکاسل در صنعت طیور خسارات گسترده ای از جهت تلفات و افت تولید در مزارع پرورش مرغ گوشتی، تخمگذار و مادر گوشتی در کشور ایجاد نموده است. استفاده گسترده از واکسن های زنده و غیرفعال نیوکاسل سطح ایمنی را تا حد زیادی افزایش می دهد، اما هنوز بیماری نیوکاسل مسئله مهمی در کشورهای در حال توسعه نظیر ایران می باشد. تحقیق حاضر با هدف تعیین توالی کامل ویروس نیوکاسل سویه Clone۱۲ IR مشتق شده از سویه لاسوتا انجام گرفت. ابتدا ویروس به تخم مرغ جنین دار SPF ۱۰ روزه تزریق شد.پس از ۷۲ ساعت مایع آلانتوئیک جمع آوری شد. مایع آلانتوئیک با کمک سانتریفوژ دور بالاو گرادیانت ساکارز به صورت مناسب تخلیص شد. RNA ویروسی با کیت تجاری مناسب استخراج شد. با استفاده از یک جفت پرایمر اختصاصی (GSP) دو قطعه cDNA ساخته شد. بدون درنظرگرفتن جایگاه ژنی هفت جفت پرایمر طراحی و ژنوم ویروس با روش PCR آمپلی فای شد. هر محصول PCR طولی برابر با (kb ۵/۲-۲) را شامل می شد. محصول PCR از روی ژل آگارز یک درصدالکتروفورز استخراج و بر روی پلاسمید pJET۱.۲ به نسبت سه به یک ligate شد، در ادامه به باکتری TOP۱۰ ترانسفورم شد. پس از تکثیر پلاسمید استخراج گردید. برای اطمینان از کلونینگ موفق آنزیم برش Bgl II استفاده شد. پلاسمیدها برای تعیین توالی به روش سنگر به شرکت تجاری معتبر ارسال شد. در نهایت با استفاده از نرم افزار مگا۵، تمام ۱۵۱۸۶ نوکلئوتید تعیین توالی گردید. و در Gene Bank با کد MH۲۴۷۱۸۹ به ثبت رسیده و قابل دسترسی می باشد. ORF شروع و پایان هر ژن مشخص شد.کلیدواژه ها
ویروس بیماری نیوکاسل, کلونینگ, لاسوتااطلاعات بیشتر در مورد COI
COI مخفف عبارت CIVILICA Object Identifier به معنی شناسه سیویلیکا برای اسناد است. COI کدی است که مطابق محل انتشار، به مقالات کنفرانسها و ژورنالهای داخل کشور به هنگام نمایه سازی بر روی پایگاه استنادی سیویلیکا اختصاص می یابد.
کد COI به مفهوم کد ملی اسناد نمایه شده در سیویلیکا است و کدی یکتا و ثابت است و به همین دلیل همواره قابلیت استناد و پیگیری دارد.