طراحی و ساخت کاست رمزکننده عامل رشد اپیدرمی انسانی برای بیان در بذر گیاه جو
- سال انتشار: 1400
- محل انتشار: فصلنامه بیوتکنولوژی کشاورزی، دوره: 13، شماره: 4
- کد COI اختصاصی: JR_JOAGK-13-4_004
- زبان مقاله: فارسی
- تعداد مشاهده: 220
نویسندگان
گروه مهندسی تولید و ژنتیک به نژادی ، دانشکده کشاورزی و منابع طبیعی، دانشگاه محقق اردبیلی، اردبیل، ایران- دانشجوی دکتری بیوتکنولوژی
گروه مهندسی تولید و ژنتیک به نژادی ، دانشکده کشاورزی و منابع طبیعی، دانشگاه محقق اردبیلی، اردبیل، ایران
تهران پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری
گروه زیست فرآورده های گیاهی، پژوهشکده زیست فناوری کشاورزی، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری، تهران، ایران
هیات علمی
پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری، پژوهشکده زیست فناوری کشاورزی، گروه زیت فراورده های گیاهی تهران کیلومتر ۱۵ اتوبان کرج-
چکیده
هدف: گیاهان کارآیی بسیاری در تولید پروتئین های ارزشمند دارویی دارند. عامل رشد اپیدرمی انسانی، اثرات بی شماری بر روی سیستم های مختلف سلولی داشته و نقش مهمی در بهبودی زخم ها و اندام زایی دارد. هدف از پژوهش اخیر ساخت سازه های ویژه تک لپه ای ها برای انتقال بعدی ژن عامل رشد اپیدرمی و تولید انبوه آن در یک گیاه تک لپه ای خودگشن یعنی جو بود. گیاه جو با داشتن عملکرد پروتئینی بالا و دگرگشنی بسیار پایین، میزبان ایده الی برای تولید عامل رشد اپیدرمی است. مواد و روش ها: به منظور دسترسی به بالاترین میزان بیان عامل رشد اپیدرمی در بذر جو، توالی ژن موردنظر بر اساس ترجیح کدونی گیاه جو با نرم افزار COOL بهینه و همراه با پیش بر اختصاصی دی هوردئین سنتز شد. همچنین توالی راهنمای پپتیدی اندامک ذخیره ای پروتئین در بذر جو در ابتدای ناحیه رمزکننده قرار گرفت. پس از دریافت قطعه سنتزی در ناقل pUC۵۷Hvorhegf، آن قطعه توسط آنزیم های SacI و HindIII از ناقل جدا و در پلاسمید pBI۱۲۱ همسانه سازی شد. در گام بعدی همسانه سازی، برای درج توالی ژن موردنظر در ناقل pGH۲۱۵، به دلیل نبود جایگاه های شناسایی یکسان در این ناقل ها، از ناقل حدواسط pBI۱۲۱Gus-۱۲ استفاده شد. بعد از برش ناقل همسانه سازی و pBI۱۲۱Gus-۱۲ توسط آنزیم های SacI و KpnI، همسانه سازی قطعه موردنظر در pBI۱۲۱Gus-۱۲ انجام گرفت. در گام آخر، ناقل pBI۱۲۱G-۱۲Hvorhegf و pGH۲۱۵ با آنزیم های KpnI و SalI هضم شده و توالی موردنظر در مرز راست T-DNA و قبل از پایان دهنده NOS قرار گرفت. نتایج: با استفاده از آزمون کلونی پی سی آر، الگوی هضم آنزیمی و توالی یابی با آغازگرهای رفت وبرگشت، درستی همسانه سازی و تولید ناقل های pBI۱۲۱Hvorhegf واجد ژن hegf با نشانگر کانامایسین و pGH۲۱۵Hvorhegf واجد ژن hegf با نشانگر هیگرومایسین، مناسب برای انتقال ژن در تک لپه ای ها تائید شد. نتیجه گیری: ناقل بیانی نوترکیب pGH۲۱۵ تغییریافته دارای کاست ژنی موردنظر همراه با نشانگر هیگرومایسین می تواند برای انتقال ژن موردنظر در تک لپه ای ها و بیان پروتئین نوترکیب در اندام ذخیره ای بذر استفاده شود.کلیدواژه ها
اگروباکتریوم تومه فاشینس, تک لپه ای, همسانه سازیاطلاعات بیشتر در مورد COI
COI مخفف عبارت CIVILICA Object Identifier به معنی شناسه سیویلیکا برای اسناد است. COI کدی است که مطابق محل انتشار، به مقالات کنفرانسها و ژورنالهای داخل کشور به هنگام نمایه سازی بر روی پایگاه استنادی سیویلیکا اختصاص می یابد.
کد COI به مفهوم کد ملی اسناد نمایه شده در سیویلیکا است و کدی یکتا و ثابت است و به همین دلیل همواره قابلیت استناد و پیگیری دارد.