طراحی و مطالعه بیوانفورماتیکی ژن صناعی موتانت زیرواحد کاتالیتیک دیفتریاتوکسین (dtxA)
- سال انتشار: 1392
- محل انتشار: مجله علمی پژوهشی دانشگاه علوم پزشکی ایلام، دوره: 21، شماره: 5
- کد COI اختصاصی: JR_SHIMU-21-5_019
- زبان مقاله: فارسی
- تعداد مشاهده: 176
نویسندگان
- Faculties of Sciences, Imam Hussein University , Tehran, Iran
چکیده
مقدمه: دیفتری ناشی از باسیل کورینه باکتریوم، بیماری مهلکی است که بقراط در ۵ قرن قبل از میلاد آنرا شرح داده است.عامل این بیماری کشنده، اگزوتوکسین DTx می باشد. دیفتریاتوکسین شامل دو زنجیره کاتالیتیک(A) و اتصال دهنده(B) می باشد. این توکسین با واسطه زنجیره Bبه رسپتور بسیاری از سلولهای اندام های بدن از جمله میوکارد ، اعصاب محیطی وکلیه ها متصل شده و زنجیره A پس از ورود به سلول، باعث مهار سنتز پروتئین و مرگ سلول هدف می شود. تاکنون از توکسوئید این باکتری به عنوان واکسن استفاده شده است. هدف از این مطالعه طراحی و تهیه ژن جهش یافته صناعی زیرواحد کاتالیتیک دیفتریاتوکسین(dtxA) و بررسی های بیوانفورماتیکی لازم به منظور بررسی بیان در وکتور pET۲۸a و تولید پروتئین نوترکیب حاصل از آن، به عنوان کاندید واکسن علیه دیفتری می باشد. مواد و روش ها: پس از تعیین و بهینه سازی ترادف ژن dtxA واجد دو جهش G۵۲E و A۱۵۸G، وبررسی های بیوانفورماتیکی مربوطه، ژن صناعی در وکتور بیانی تهیه گردیده و صحت آن مورد مطالعه قرار گرفت. سازه ژنی dtxA pET۲۸a/ به میزبان بیانی E.Coli Bl۲۱ DE۳ منتقل گردید. سپس بیان و تولید پروتئین نوترکیب حاصل به عنوان کاندید واکسن، با کمک وسترن بلات مورد ارزیابی قرار گرفت. یافته ها: نتایج بیوانفورماتیکی حاصل از بهینه سازی کدون های ژن زیرواحد A دیفتریاتوکسین منجر به سفارش و تهیه ژن صناعی جهش یافته این زیرواحد در وکتور بیانی گردید. آنالیز این ژن در این وکتور با کمک واکنش هضم آنزیمی و الکتروفورز، صحت آن را تائید نمود. پس از بیان و تولید پروتئین نوترکیب ، این پروتئین با وسترن بلات تایید گردید. بحث و نتیجه گیری: با توجه به مزیت های پروتئین نوترکیب DTxA به توکسوئید دیفتری به نظر می آید پروتئین نوترکیب حاصل می تواند جایگزینی مناسب به عنوان کاندید واکسن علیه دیفتریاتوکسین قرار گیرد که نیازمند مطالعات بیشتر می باشد.کلیدواژه ها
Corynebacterium diphtheria, Diphtheria toxin, dtxA Gene, recombinant protein, کورینه باکتریوم دیفتریه، دیفتریاتوکسین، پروتئین زیرواحدDTxA، ژن dtxA ، واکسن نوترکیباطلاعات بیشتر در مورد COI
COI مخفف عبارت CIVILICA Object Identifier به معنی شناسه سیویلیکا برای اسناد است. COI کدی است که مطابق محل انتشار، به مقالات کنفرانسها و ژورنالهای داخل کشور به هنگام نمایه سازی بر روی پایگاه استنادی سیویلیکا اختصاص می یابد.
کد COI به مفهوم کد ملی اسناد نمایه شده در سیویلیکا است و کدی یکتا و ثابت است و به همین دلیل همواره قابلیت استناد و پیگیری دارد.