تولید سازه نوترکیب با همسانه سازی ژن دومین ۴ آنتی ژن حفاظتی و هم جوشی آن با ژن دومین ۱ فاکتور کشنده باسیلوس آنتراسیس در اشرشیاکلی

مقدمه: سیاه زخم یک بیماری مشترک بین انسان و دام است. عامل ایجاد کننده این بیماری مهلک باکتری باسیلوس آنتراسیس می ­باشد. در حال حاضر آنتی ژن حفاظتی(PA) به عنوان واکسن موثر سیاه زخم مورد استفاده قرار می­گیرد. دومین ۴ این آنتی ژن به همراه دومین ۱ فاکتور کشنده(LF)، ایمونوژن ­های قوی این باکتری بوده و به عنوان کاندید مناسب واکسن علیه آن مطرح می باشند. هدف ما در این تحقیق، همسانه سازی ژن دومین ۴ آنتی ژن حفاظتی(PAD۴) و هم جوشی آن با ژن دومین ۱ فاکتور کشنده(LFD۱) باکتری، به منظور بررسی توانایی آن ها در القاء ایمنی حفاظتی می باشد. مواد و روش ها: در این مطالعه تجربی، از یک وکتور pGEM-T easy نوترکیب حاوی ژن­ LFD۱ استفاده شد. سپس ژن PAD۴ با واکنش آنزیمی PCR تکثیر و جداسازی شده و به طور جداگانه در وکتور pGEM-T easy دیگری همسانه سازی گردید. بعد از آن واکنش الحاق ژن PAD۴ به ژن LFD۱ در وکتور فوق با تعیین جهت گیری LFD۱ و توسط جایگاه های آنزیمی PstI و XbaI انجام پذیرفت. سازه نوترکیب حاصل از دو ژن فوق در ناقل بیانی pET۲۸a به کمک آنزیم های محدود الاثر BamHI و XhoI زیر همسانه سازی گردید و پس از تعیین جهت گیری ژن ها، میزبان بیانی BL۲۱ توسط این ناقل نوترکیب تراریخت گردید. یافته های پژوهش: همسانه سازی اولیه و هم جوشی قطعات ژنی PAD۴ و LFD۱ در ناقل pGEM-T easy با موفقیت انجام شد و پس از تایید فرآیند فوق با دو روش برش آنزیمی و PCR، سازه نوترکیب حاصل با موفقیت در pET۲۸a زیر همسانه سازی شد. بحث و نتیجه گیری: با توجه به ایمونوژن بودن نواحی PAD۴ و LFD۱، بیان پروتیئن این سازه نوترکیب حاصل از نواحی ژنی الحاق شده فوق، می تواند برای القاء ایمنی محافظتی، به عنوان کاندید مناسب واکسن سیاه زخم مطرح باشد.

کلیدواژه ها:

Bacillus anthracis ، Protective antigen (PA) ، Lethal factor (LF) ، Fusion ، Vaccine candidate ، باسیلوس آنتراسیس ، آنتی ژن حفاظتی(PA) ، فاکتور کشنده(LF) ، هم جوشی ، کاندید واکسن