تهیه آزمایشگاهی وکتور T/A برای تسهیل همسانه سازی قطعات DNA حاصل از PCR
عنوان مقاله: تهیه آزمایشگاهی وکتور T/A برای تسهیل همسانه سازی قطعات DNA حاصل از PCR
شناسه ملی مقاله: JR_JOAGK-5-2_011
منتشر شده در در سال 1392
شناسه ملی مقاله: JR_JOAGK-5-2_011
منتشر شده در در سال 1392
مشخصات نویسندگان مقاله:
ناهید مسعودی
نعمت سخندان بشیر
خلاصه مقاله:
ناهید مسعودی
نعمت سخندان بشیر
امروزه مهندسی ژنتیک جزء اجتناب ناپذیر پژوهشهای زیست شناسی نوین میباشد و همسانهسازی به عنوان یکی از اصلیترین بخشهای این علم، کاربرد گستردهای دارد. پلاسمیدها یکی از پرکاربردترین حاملها میباشند که امکان تکثیر ژن مورد نظر را به صورت نامحدود در میزبان عمدتا" باکتریایی فراهم میکنند. وکتورهای T/A نوعی از حاملهای پلاسمیدی میباشند که امکان همسانهسازی قطعه دیانای تکثیر شده با آنزیم Taq DNA polymerase (در واکنش زنجیرهای پلیمراز) را تسهیل می کنند. با توجه به محدودیت امکانات، خرید کیت همسانهسازی حاوی این پلاسمید ممکن است به سختی میسر باشد. به همین جهت تهیه این وکتور با کارایی خوب در آزمایشگاه حائز اهمیت است. در این پژوهش، بعد از تهیه سلول های مستعد (رقیب) از باکتری Escherchia coli، پلاسمید حلقوی و فاقد قطعه خارجی pTZ۵۷R به این سلولها ترانسفورم گردید. پس از استخراج پلاسمید به روش لیزآلکالینی، با آنزیم EcoRV پلاسمید برش داده شده و خطی گردید. سپس آنزیم برشی غیرفعال گردید و نوکلئوتید تیمین به انتهای آزاد این پلاسمید خطی اضافه شد. سپس کارایی حامل تهیه شده طی واکنش اتصال دیانای به پلاسمید و متعاقب آن، ترانسفورماسیون باکتری تایید گردید. بعلاوه، بخشی از ژنوم پوتیویروس که با جفت آغازگر یونیورسال مورد تکثیر قرار گرفته بود در پلاسمید ساخته شده مورد همسانه سازی وترادف یابی قرار گرفت که در مقایسه با توالیهای همقطار موجود در پایگاه ژن بانک بعنوان ویروس موزائیک سویا تشخیص داده شد.
کلمات کلیدی: T/A وکتور, ویروس موزائیک سویا, تهیه حامل همسانه سازی, pTZ۵۷R/T
صفحه اختصاصی مقاله و دریافت فایل کامل: https://civilica.com/doc/1282600/