کلونینگ و بیان پلی پپتید نوترکیب HPV۱۶ / ۱۸ L۱-L۲-E۷ در سیستم بیانی باکتری
سال انتشار: 1400
نوع سند: مقاله ژورنالی
زبان: فارسی
مشاهده: 450
فایل این مقاله در 10 صفحه با فرمت PDF قابل دریافت می باشد
- صدور گواهی نمایه سازی
- من نویسنده این مقاله هستم
استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:
شناسه ملی سند علمی:
JR_NCMBJ-11-43_006
تاریخ نمایه سازی: 30 شهریور 1400
چکیده مقاله:
سابقه و هدف: ویروسهای پاپیلومای انسانی (HPV) به ویژه انواع ۱۶ و ۱۸ مهمترین عامل سرطان دهانه رحم محسوب می شوند که شایعترین آنها، دو نوع ۱۶ و ۱۸ هستند. از بین انواع پروتئین های مرتبط با HPV، پروتئین های کپسیدی L۱ و L۲ و نیز انکوپروتئین E۷ به عنوان آنتی ژن های هدف برای طراحی واکسن مطرح می باشند. در سالهای اخیر، واکسن های نوترکیب پلی پپتیدی چند اپی توپی مورد توجه قرار گرفته اند. هدف از این مطالعه طراحی سازه فیوژنی L۱-L۲-E۷ و ارزیابی بیان آن در سیستم بیانی باکتری است.
مواد و روش ها: در این مطالعه، با استفاده از آنالیزهای بیوانفورماتیکی مختلف، اپی توپ های ایمنوژنیک و حفاظت شده از پروتئین های L۱، L۲ و E۷ ویروسهای پاپیلومای انسانی نوع ۱۶ و ۱۸ انتخاب شدند. پس از سنتز توالی فیوژن طراحی شده L۱-L۲-E۷ در وکتور کلونینگ pUC۵۷، ساب کلون کردن آن در وکتور بیان پروکاریوتی pET۲۴a(+) توسط آنزیمهای محدودالاثر EcoRI/ HindIII انجام شد. بیان پلی پپتید چند اپی توپی نوترکیب در سویه باکتری E.coli Rosetta توسط القاگر IPTG انجام و تایید آن توسط آنالیزهای SDS-PAGE و وسترن بلات با استفاده از آنتی بادی ضد دنباله هیستیدینی صورت گرفت. بهینه سازی بیان تحت شرایط مختلف جذب (در طول موج ۶۰۰ نانومتر)، دما و زمان پس از القا و غلظت IPTG انجام شد.
یافته ها: ساب کلون کردن سازه ژنی L۱-L۲-E۷ در وکتور pET توسط حضور باند حدود ۵۲۵ جفت باز روی ژل آگارز بعد از هضم آنزیمی تایید شد. نتیجه بیان پلی پپتیدL۱-L۲-E۷ در باکتری، حضور باند حدود ۲۰ کیلودالتون را روی ژل SDS-PAGE و وسترن بلات آشکار کرد. بهترین شرایط برای بیان پلی پپتید نوترکیب در دمای ۳۷ درجه، جذب حدود ۷/۰ تا ۸/۰، غلظت IPTG یک میلی مولار و زمان ۱۶ ساعت پس از القا بود.
نتیجه گیری: بیان موفق سازه پلی پپتید چند اپی توپی L۱-L۲-E۷ در سیستم باکتری انجام شد. تخلیص پلی پپتید نوترکیب به عنوان کاندید واکسن در مراحل بعدی صورت خواهد گرفت.
کلیدواژه ها:
Human papillomavirus ۱۶/۱۸ ، Capsid proteins ، oncogene protein E۷ ، Bacterial expression system ، Iau Science ، ویروس پاپیلومای انسانی ۱۶ و ۱۸ ، پروتئین های کپسید ، پروتئین انکوژن E۷ ، سیستم بیانی باکتری ، Iau Science
نویسندگان
متین کیال
Department of Biology, Science and Research Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran
اعظم بوالحسنی
Department of Hepatitis and AIDS, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran
زهرا نورمحمدی
Department of Biology, Science and Research Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran
مجید صادقی زاده
Department of Genetics, Faculty of Biological Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
مراجع و منابع این مقاله:
لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این مقاله را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود مقاله لینک شده اند :