تکثیر و همسانه سازی ژن سه قسمتی lsc در وکتور pcDNA۳.۱ و بررسی بیان آن در لاین سلولی

سابقه و هدف: اسهال دومین عامل رایج مرگ و میر کودکان زیر ۵ سال است. مهم­ترین سویه­های بیماری­زایی اشریشیاکلی انتروتوکسیژنیک با تولید سم Lt و St موجب بیماری اسهال مسافران و اشریشیاکلی انتروهموراژیک با ترشح سم شبه شیگا موجب اسهال خونی می­شود. زیرواحد B انتروتوکسین کلره در باکتری ویبریوکلرا در ایجاد بیماری اسهال نقش به­سزایی دارد.به­احتمال با ترکیب اپی-توپ­های CtxB، LtB و StB (LSC) و تولید واکسن تری والان می­توان آنتی­بادی اختصاصی تری برای مقابله با این سموم ایجاد کرد. هدف از این تحقیق تکثیر ژن کایمر lsc جهت کلونینگ در وکتور pcDNA۳.۱(+) به­منظور طراحی DNA واکسن و بررسی بیان در وکتور یوکاریوتیک است.   مواد و روش­ ها: توالی ژن lsc پس از طراحی پرایمر و تکثیر به­وسیله PCR به وکتورpcDNA۳.۱(+) منتقل شد. وکتور pcDNA۳.۱(+) و محصول PCR با استفاده از آنزیم HindIII و EcoRI مورد هضم قرار گرفت. کلونینگ ژن lsc در وکتورpcDNA۳.۱(+) و PCR انجام شد. کلون­ها مورد هضم آنزیمی قرار گرفتند. جهت اطمینان از بیان ژن lsc به سلول HEK-۲۹۳T منتقل و با استفاده از روش وسترن بلاتینگ مورد تایید قرار گرفت.   یافته­ ها: ژن lsc پس از PCR و کلونینگ در وکتورpcDNA۳.۱(+) با استفاده از هضم آنزیمی مورد تایید قرار گرفت و قطعه­ای به­طول  bp۹۳۳ رویت و تایید شد. سپس با استفاده از کیت توربوفکت به سلول HEK-۲۹۳T منتقل و بیان پروتئین نوترکیب به روش وسترن بلاتینگ مورد تایید قرار گرفت و پروتئین به وزن ۳۹ کیلودالتون تایید شد.   نتیجه گیری: نتایج به­دست آمده از ژن کایمر به­خوبی در لاین سلولی بیان و توسط وسترن بلاتینگ تایید شد که می­تواند کاندید مناسبی برای مقابله با عفونت باکتریایی باشد.

کلیدواژه ها:

Cloning ، lsc gene ، DNA vaccine ، IAU science ، همسانه سازی ، ژن lsc ، DNA واکسن ، IAU science