بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب ژن سنتتیک زنجیره HC تتانوتوکسین در سیستم بیانی پروکاریوت
- سال انتشار: 1393
- محل انتشار: مجله دانشگاه علوم پزشکی شهرکرد، دوره: 16، شماره: 1
- کد COI اختصاصی: JR_SKUMS-16-1_012
- زبان مقاله: فارسی
- تعداد مشاهده: 389
نویسندگان
گروه و مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشگاه جامع امام حسین(ع)، تهران، ایران
گروه و مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشگاه جامع امام حسین(ع)، تهران، ایران
مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی کاربردی -دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله عج
گروه و مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشگاه جامع امام حسین(ع)، تهران، ایران
مرکز تحقیقات آسیب های شیمیایی- دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله عج
چکیده
زمینه و هدف: توکسین کلستریدیوم تتانی یا تتانواسپاسمین عامل بیماری مهلک کزاز است. امروزه از توکسوئید آن به عنوان واکسن استفاده می شود. تتانواسپاسمین شامل سه زنجیره L، HN و HC می باشد. زنجیره HC بخش اتصال دهنده و ایمونوژنیک آن است و به عنوان کاندیدای واکسن مطرح می باشد. هدف از این مطالعه، طراحی و تهیه ژن صناعی زنجیره HC تتانواسپاسمین، بیان و بهینه سازی آن و تخلیص پروتئین نوترکیب حاصل از آن به عنوان کاندیدای واکسن است. روش بررسی: در این مطالعه آزمایشگاهی پس از انجام مطالعات بیوانفورماتیکی و بهینه سازی ترادف ژن HC، سفارش سنتز ژن در وکتور بیانی pET۲۸a داده شد. تایید آن به کمک هضم آنزیمی انجام شد. سپس این سازه ژنی در میزبان مناسب (E. Coli Bl۲۱DE۳) تراریخت گردید. پس از بیان ژن و تخلیص پروتئین نوترکیب، این پروتئین با کمک وسترن بلات مورد تایید قرار گرفت. یافته ها: آنالیز بیوانفورماتیکی و مولکولی این ژن، صحت آن را تایید نمود. باند bp ۱۳۵۶ ژن Hc در ژل آگارز و باند ۵۰ کیلو دالتونی بیان ژن در ژل SDS-PAGE و در غشای نیترو سلولز (وسترن بلات) مشاهده شد. پروتئین نوترکیب در هر دو شکل محلول و نامحلول (اجسام توده ای شکل) تولید شده بود. این دو شکل پروتئین با هر دو روش طبیعی و دناتوره به میزان زیادی تخلیص گردید. نتیجه گیری: با توجه به مزیت های پروتئین نوترکیب HC به توکسوئید کزاز به نظر می آید پروتئین نوترکیب حاصل می تواند به عنوان کاندیدای واکسن جایگزینی مناسبی برای واکسن کزاز باشد.کلیدواژه ها
Tetanus Toxin, Recombinant Hc chain, Expression, vaccine candidate, توکسین کزاز, زنجیره نوترکیب HC, بیان, کاندید واکسناطلاعات بیشتر در مورد COI
COI مخفف عبارت CIVILICA Object Identifier به معنی شناسه سیویلیکا برای اسناد است. COI کدی است که مطابق محل انتشار، به مقالات کنفرانسها و ژورنالهای داخل کشور به هنگام نمایه سازی بر روی پایگاه استنادی سیویلیکا اختصاص می یابد.
کد COI به مفهوم کد ملی اسناد نمایه شده در سیویلیکا است و کدی یکتا و ثابت است و به همین دلیل همواره قابلیت استناد و پیگیری دارد.