ایجاد سیستم شناسایی وجود کوفاکتور مولیبدئوم در باکتری Escherichia coli
- سال انتشار: 1399
- محل انتشار: دوفصلنامه مهندسی ژنتیک و ایمنی زیستی، دوره: 9، شماره: 1
- کد COI اختصاصی: JR_GEB-9-1_002
- زبان مقاله: فارسی
- تعداد مشاهده: 294
نویسندگان
Department of Plant Breeding and Biotechnology, College of Plant Production, Gorgan University of Agricultural Science and Natural Resources, Iran
Department of Plant Breeding and Biotechnology, College of Plant Production, Gorgan University of Agricultural Science and Natural Resources, Iran
Plant Biochemistry Group, Heinrich Heine University, Dusseldorf, Germany
Department of Plant Breeding and Biotechnology, College of Plant Production, Gorgan University of Agricultural Science and Natural Resources, Iran
Plant Biochemistry Group, Heinrich Heine University, Dusseldorf, Germany
چکیده
یکی از آنزیمهای درگیر در تطبیق پذیری با شرایط مختلف محیطی، آنزیم بیوتین سولفوکساید ریداکتاز (BisC) است که علاوه بر توانایی تبدیل بیوتین سولفوکساید به بیوتین در شرایط اکسیداتیو، میتواند متیونین سولفوکساید را نیز به متیونین تبدیل کند. اسید آمینه متیونین چه بصورت آزاد و چه در زنجیره پروتئینی اهمیت بسیاری در فرایند سنتز پروتئین و فعالیت آن داراست. آنزیم بیوتین سولفوکساید ریداکتاز (BisC) برای فعال بودن وابسته به کوفاکتور باکتریایی MGDـBis میباشد. در این مطالعه به منظور تایید فعال بودن کوفاکتور باکتریایی MGDـBis روشی غیرمستقیم طراحی شد که در این روش از آنزیم باکتریایی بیوتین سولفوکساید (BisC) به عنوان ژن گزارشگر استفاده شد. در این راستا سازه ژنی BisCـpJet ساخته شد و شوک حرارتی به باکتری E.coli استرین Mach1 منتقل شد. کلونهای تشکیل شده در محیط LB جامد با آنتی بیوتیک آمپیسیلین 200 µg/ml انتخاب شدند و سپس واکنش PCR روی آنها صورت گرفت. پس از تایید نتایج توالی یابی کلونهای مثبت، قطعه مورد نظر جدا و به ناقل بیانی pETDuet انتقال داده شد. کلونهای حاوی ژن به باکتری میزبان Rossetta منتقل شدند. فرابیان آنزیم BisC بر روی ژل PAGEـSDS مورد بررسی قرار گرفت و نیز فعالیت این آنزیم بصورت باند بیرنگ بر اثر اکسید شدن متیل وایولوژن روی ژل Native مشاهده شد که نشان دهنده حضور فعال کوفاکتور MGDـBis بود.کلیدواژه ها
Key words: Bis-MGD, Biotin sulfoxide, Escherichia coli, Molybdenum, Over expression, اشریشیا کلای, بیان بیش از حد, بیس ـ ام جی دی, بیوتین سولفوکساید, مولیبدئوماطلاعات بیشتر در مورد COI
COI مخفف عبارت CIVILICA Object Identifier به معنی شناسه سیویلیکا برای اسناد است. COI کدی است که مطابق محل انتشار، به مقالات کنفرانسها و ژورنالهای داخل کشور به هنگام نمایه سازی بر روی پایگاه استنادی سیویلیکا اختصاص می یابد.
کد COI به مفهوم کد ملی اسناد نمایه شده در سیویلیکا است و کدی یکتا و ثابت است و به همین دلیل همواره قابلیت استناد و پیگیری دارد.