تولید فرم نوترکیب ایزوفرم تیپ 1 متالوتیونین برنج (OsMTI-1b) در باکتری اشریشیاکلی و بررسی قابلیت اتصال آن به فلز نیکل
- سال انتشار: 1393
- محل انتشار: فصلنامه بیوتکنولوژی کشاورزی، دوره: 6، شماره: 1
- کد COI اختصاصی: JR_JOAGK-6-1_011
- زبان مقاله: انگلیسی
- تعداد مشاهده: 263
نویسندگان
چکیده
گیاهان به مکانیسمهای سلولی مختلفی در مقابله با اثر سمی فلزات سنگین مجهز شدهاند. یکی از مهمترین این مکانیسم‌‌ها، تولید پروتئین‌ها و پپتیدهای متصل شونده به فلزات، مانند متالوتیونین‌ها (MT) می‌باشد. متالوتیونین‌ها، گروهی از پروتئین‌ها با وزن مولکولی کم و غنی از آمینواسیدهای سیستئین هستند که دارای ظرفیت بالای اتصال به فلزات میباشند. در این تحقیق توالی کد کننده‌ی ایزوفرمOsMTI-1b از گیاه برنج، به عنوان گیاه مدل در بین تک لپه‌ای‌ها، در ناقل بیانی pET41a همسانه‌سازی و به میزبان بیانی E. coli سویه‌ی Rosetta (DE3) منتقل شد. پس از القا محیط کشت توسط IPTG، میزان مناسبی از پروتئینهای نوترکیب در فاز محلول تولید و با استفاده از روش کروماتوگرافی جذبی خالص سازی شد. سلول‌‌‌‌‌های باکتری بیان‌کننده‌ی پروتئینهای نوترکیب در محیط LB حاوی نمک NiCl2 رشد داده شدند و منحنی رشد آن‌ها در مقایسه با شاهد ترسیم شد. مقدار کاهش فلز نیکل در محیط کشت و تجمع آن‌ها در رسوب باکتریایی توسط دستگاه طیف سنجی پلاسمای جفت شده‌ی القائی (ICP-AES) بهدست آمد. بر اساس نتایج مشخص گردید بیان ایزوفرمOsMTI-1b از طریق افزایش تجمع درون سلولی فلز نیکل موجب افزایش تحمل باکتری E. coli به این فلز میگردد. همچنین، بررسی الگوی جذب نور و واکنش DTNB با پروتئینهای انکوبه شده با فلز نیکل در شرایط این ویترو، تشکیل دستجات فلز/تیول در پروتئین نوترکیب GST-OsMTI-1b را اثبات نمود. یافتههای پژوهش حاضر میتواند منعکس کننده نقش احتمالی ایزوفرمOsMTI-1b در تحمل گیاه برنج به تنش فلزات سنگین باشد.کلیدواژه ها
متالوتیونین, همسانه سازی, بیان دگرساخت پروتئین, فلزات سنگیناطلاعات بیشتر در مورد COI
COI مخفف عبارت CIVILICA Object Identifier به معنی شناسه سیویلیکا برای اسناد است. COI کدی است که مطابق محل انتشار، به مقالات کنفرانسها و ژورنالهای داخل کشور به هنگام نمایه سازی بر روی پایگاه استنادی سیویلیکا اختصاص می یابد.
کد COI به مفهوم کد ملی اسناد نمایه شده در سیویلیکا است و کدی یکتا و ثابت است و به همین دلیل همواره قابلیت استناد و پیگیری دارد.