شناسایی الگوی پرویتیینی توبرکولین گاوی و توبرکولین مرغی تولید موسسه رازی و مقایسه آن با نمونه های توبرکولین استانداردهای ملی و بین المللی به روش ‭SDS-PAGE‬

عمده تولید بخش تحقیق وتهیه توبرکولین، توبرکولین گاوی وتوبرکولین مرغی می باشد. در پروسه تولید توبرکولین ، هدف دستیابی به پروتیینهای مورد نیاز جهت تست توبرکولین است.لذا با توجه به اهمیت تولید فرآورده،شناسایی باندهای پروتیینی توبرکولین گاوی وتوبرکولین مرغی،تعیین وزن مولکولی آنها ومقایسه آنها با استانداردبروش ‭SDS_PAGE ‬لازم است. در این تحقیق محیط دورسه هنلی‭(Dorset-Henley ( ‬تهیه ودر فرنباخ تقسیم و سپس بمدت ‮‭20‬ دقیقه در دمای ‮‭121‬ درجه سانتیگراد اتوکلاو گردید. ‮‭30‬ فرنباخ به دو دسته ‮‭15‬ تایی تقسیم و ‮‭15‬ فرنباخ با مایکوباکتریوم بویس سویه ‭AN‬5 و ‮‭15‬ فرنباخ دیگر با مایکوباکتریوم ایویوم سویه D4 تلقیح شد. ظروف کشت بمدت 9 هفته در گرمخانه در دمای ‮‭37‬ درجه سانتیگراد نگهداری و پس از آن در دمای ‮‭100‬ درجه سانتیگرادبمدت 3 ساعت در معرض بخار آزاد قرار گرفتند. بعد عمل ترسیب توسط تری کلرواستیک اسید %‮‭40‬ و تغلیظ توسط تامپون فسفات وتنظیم اسیدیته(‮‭6/8‬‭=Ph ( ‬انجام گرفت. نمونه های توبرکولین تهیه شده با کمک دستگاه ‭SDS_PAGE ‬مورد ارزیابی قرار گرفتند.در توبرکولین گاوی 6 باندپروتیینی باوزن های مولکولی حدود ‮‭5/5‬ ، ‮‭17‬ ، ‮‭24/7‬ ، ‮‭28/7‬ ، ‮‭51‬ ، ‮‭63/4‬ کیلو دالتون و توبرکولین مرغی دارای 6 باند پروتیینی با وزن های مولکولی حدود ‮‭10/6‬ ، ‮‭42/2‬ ، ‮‭61/3‬ ، ‮‭66/2‬ ، ‮‭78/8‬ و ‮‭90/8‬ کیلو دالتون حاصل شد. همچنین از ارزیابی استاندارد توبرکولین گاوی نیز 6 باند پروتیینی با وزن های مولکولی حدود ‮‭5/5‬ ، ‮‭11/1‬ ، ‮‭14/4‬ ، ‮‭23‬ ، ‮‭63‬ و ‮‭79‬ کیلودالتون ودر آنالیزاستاندارد توبرکولین مرغی 8 باندپروتیینی با وزن های مولکولی حدود 9 ، ‮‭24/6‬ ، ‮‭26/5‬ ، ‮‭30/5‬ ، ‮‭39/4‬ ، ‮‭53/7‬ ، ‮‭60/3‬ ، ‮‭71/1‬ کیلودالتون مشاهده گردید. بر اساس یافته های این مطالعه بهترین نتایج آزمون ‭SDS_PAGE ‬در ارتباط با تفکیک پروتیین های توبرکولین تحت غلظت ژل جداکننده %‮‭12‬ ولتاژ دستگاه ‮‭70‬ ولت و رنگ آمیزی ژل با روش کوماسی بلو ‮‭250‬‭-R ‬قابل دستیابی خواهد بود.