جداسازی و شناسایی باکتری های موثر در تولید پروبیوتیک از میگوهای پرورشی

نوع محتوی: طرح پژوهشی
زبان: فارسی
استان موضوع گزارش: تهران
شهر موضوع گزارش: تهران
شناسه ملی سند علمی: R-1092855
تاریخ درج در سایت: 27 بهمن 1397
دسته بندی علمی: علوم کشاورزی
مشاهده: 332
تعداد صفحات: 214
سال انتشار: 1391

نسخه کامل طرح پژوهشی منتشر نشده است و در دسترس نیست.

  • من نویسنده این مقاله هستم

استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:

لینک ثابت به این طرح پژوهشی:

چکیده طرح پژوهشی:

صنعت تکثیر و پرورش میگو به ویژه گونه پا سفید ‭(Litopenaeus vannamei) ‬یکی از فعالیت های عمده آبزی پروری در کشورهای جهان از جمله ایران می باشد ولی بروز بیماری ها از عوامل اصلی محدود کننده افزایش تولید می باشد و با توجه به اثرات سو استفاده نادرست آنتی بیوتیک ها و مواد شیمیایی، کنترل و پیشگیری از بروز بیماری ها نیاز به اقدامات نوینی دارد که مقرون به صرفه، موثر و ایمن برای محیط و انسان باشند. لذا این پژوهش با هدف جداسازی و شناسایی مولکولی پروبیوتیک های باکتریایی از دستگاه گوارش میگوی پا سفید و محیط زیست آن انجام شد. برای این منظور در طی پنج ماه از سه سایت اصلی پرورش میگوی استان بوشهر، نمونه برداری از ‮‭150‬ قطعه میگوی پرورشی پا سفید و ‮‭135‬ نمونه آب و رسوب از استخر و کانال های ورودی و خروجی به روش استاندارد صورت گرفت و در کلیه مراحل نمونه گیری، فاکتورهای فیزیکوشیمیایی آب، ثبت و بیومتری میگوها انجام شد. جداسازی پروبیوتیک ها از نمونه های فوق، به روش کشت بر روی محیط های تریپتیک سوی آگار و ‭TCBS ‬پس از گرمخانه گذاری در دمای ‮‭30‬ درجه سانتیگراد به مدت ‮‭24-48‬ ساعت انجام شد و اثر ضدمیکروبی عصاره محیط کشت جدایه های فوق بر روی باکتری ‭Vibrio harveyi ‬به روش انتشار در آگار مورد ارزیابی قرار گرفت و بهترین جدایه ها گزینش گردید. شناسایی باکتری های منتخب با روش توالی یابی ‮‭16‬‭S rDNA ‬انجام شد. سینتیک رشد باکتری های منتخب و اثر عوامل محیطی بر تولید ترکیبات ضدمیکروبی و ماندگاری آنها به ترتیب در شرایط شوری (%‮‭1/5-5/5‬) و(‮‭9-5‬‭) ppt‬‮‭0-50‬)، ‭pH) ‬و دمای(؛‮‭30‬‭-C‬‮‭40‬) و (؛‮‭35‬‭-C‬‮‭100‬) مورد بررسی قرارگرفت و پروفایل مقاومت آنتی بیوتیکی باکتری های منتخب تعیین گردید. استخراج مواد زیستی تولید شده توسط باکتری های منتخب به روش دیالیز و تعیین هویت آنها به روش های ‭SDS-PAGE ‬الکتروفورزیس، طیف سنجی ماورای بنفش و گاز کروماتوگرافی جرمی انجام شد. نتایج حاصل از این پژوهش، بیشترین فراوانی باکتری های هتروتروف هوازی و بی هوازی اختیاری را در دستگاه گوارش میگو ها ‭CFU/g‬‮‭105‬ا (‮‭3/04 0/75‬) در ماه مهر نشان داد. جنس %‮‭88/37‬‭) .Vibrio spp) ‬و %‮‭27/27‬‭) .Bacillus spp) ‬به ترتیب دارای بیشترین فراوانی ارزیابی شدند. از میان ‮‭198‬ باکتری جداسازی شده، دو سویه جداسازی شده از دستگاه گوارش و رسوب استخر که بیشترین میزان بازدارندگی رشد و پایداری در برابر باکتری ‭V.harveyi ‬را داشتند، انتخاب گردیدند. براساس توالی یابی ‮‭16‬‭S rDNA ‬این باکتری ها به ترتیب ‭Bacillus subtilis subsp. inaquosorum strain IS‬‮‭02‬ ‭(GenBank: JN‬‮‭1.856456‬) و ‭Bacillus vallismotis IS‬‮‭03‬ ‭(GenBank: JQ‬‮‭1.085958‬) شناسایی و در بانک جهانی ژن ثبت شدند. بر اساس نتایج حاصل از تعیین هویت مواد زیستی تولید شده توسط باکتری های منتخب در ‭SDS-PAGE ‬الکتروفورزیس، باکتری ‭Bacillus subtilis subsp. inaquosorum strain IS‬‮‭02‬ هیچ باندی نشان نداد و باکتری ‭Bacillus vallismotis IS‬‮‭03‬ دو باند در محدوده وزن مولکولی ‮‭25‬ کیلو دالتون و ‮‭35-45‬ کیلو دالتون ایجاد کرد که احتمالا به ترتیب مربوط به شبه باکتریوسین ها و گروه ‭III ‬باکتریوسین های باسیلوسی می باشند. طیف حاصل از عصاره باکتری های منتخب نیز در محدوده (‮‭265-260‬ ‭nm) ‬بیشترین پیک را داشت که مربوط به گروه های پپتیدی می باشد و همچنین در آنالیز ‭GC-MS ‬بیشترین درصد پیک کروماتوگرام هر دو باکتری مربوط به ‭pyrrolopyrazines ‬بود که دارای خواص آنتی باکتریال است. در مجموع با توجه به نتایج حاصل از این پژوهش می توان اظهار داشت که هر دو باکتری سازگاری بسیار خوبی با شرایط اکولوژیک زیستگاه های تکثیر و پرورش میگو داشته و می توان از آن ها به عنوان پروبیوتیک مناسب در این صنعت استفاده نمود و امید است به کمک نتایج این پژوهش گامی در جهت تحقق تولید ملی پروبیوتیک بومی در کشور ایران برداشت.