امیرحسین زمانی - دانشجوی کارشناسی ارشد بیوتکنولوژی دانشکده علوم کشاورزی دانشگاه گیلا
محمدمهدی سوهانی - عضو هیئت علمی گروه بیوتکنولوژی دانشکده علوم کشاورزی دانشگاه گیلان
عبدالله حاتم زاده - عضو هیئت علمی گروه بیوتکنولوژی دانشکده علوم کشاورزی دانشگاه گیلان
علیرضا افشاری فر - عضو هیئت علمی گروه گیاهپزشکی دانشکده علوم کشاورزی دانشگاه شیراز

بیماری تریستزا از لحاظ اقتصادی مهمترین بیماری ویروسی مرکبات است که سبب نابودی بیش از 85 میلیون اصله درخت در سراسر جهان شده است. امروزه مهمترین و کاربردی ترین راهبرد ایجاد مقاومت علیه ویروس ها بر اساس بیماری تریستزا از لحاظ اقتصادی مهمترین بیماری ویروسی مرکبات است که سبب نابودی بیش از 85 میلیون اصله درخت در سراسر جهان شده است. امروزه مهمترین و کاربردی ترین راهبرد ایجاد مقاومت علیه ویروس ها بر اساس مقاومت حاصل از پاتوژن (PDR) و مکانیسم اپی ژنتیک PTGSجهت تخریب RNA ویروسی پایه گذاری شده است. در این شیوه، انتقال بخشی از ژن ویروسی موجب اختلال در چرخه زیستی ویروس مرتبط یا خویشاوند در گیاه میزبان می شود. با القا موثر مکانیسم طبیعی PTGS از طریق ورود یک رشته dsRNA سنتتیک، توالی های هدف ویروس شناسایی و تحت برش اندونوکلئولیتیکی قرار گرفته و سرکوب می شوند. بر این اساس، مطالعه حاضر با هدف ساخت یک بخش بسیار حفاظت شده از ژن کپسید پروتئینی ویروس CTV به صورت توالی های سنس و آنتی سنس و کلونینگ آن در وکتور القاء خاموشی ژن (ABRC) pFGC5941 جهت تولید dsRNA و امکان القا مقاومت PDR در گیاه مرکبات انجام شده است. قطعه کلون شده به صورت موزاییک بوده و در دو مرحله در وکتور مذکور و در دو طرف اینترون CHSA وارد شد. بررسی نهایی پلاسمید نوترکیب توسط PCR و هضم دوگانه آنزیمی انجام شد و نشان دهنده تکثیر صحیح و صحت درج و حضور قطعات مذکور در پلاسمید خاموشی موردنظر بود. انتظار می رود با انتقال سازه خاموشی حاصل به گیاه مرکبات و تولید dsRNA مکانیسم PTGS علیه طیف گسترده ای از نژادهای ویروس CTV فعال شود.

کلونینگ ، وکتور خاموشی , PTGS ، PDR ، dsRNACTV ، PFGC 5941,