پروتکلهای فلوسایتومتری برای تعیین اندازه ژنوم در طیف وسیعی از گیاهان دارویی

در دهه های گذشته پیشرفت قابل توجهی در استفاده از فلوسایتومتری در زمینه های مختلف رشته گیاه شناسی دیده شده است. این رشد به دلیل مزایای فلوسایتومتری شامل سرعت بالا، سهولت آمادهسازی نمونه، نمونه گیری غیر مخرب و تجزیه و تحلیل بافتهای غیر فعال میتوزی میباشد. با وجود این مزایا، اغلب نیاز به مواد گیاهی تازه ممکن است مانع گسترش بیشتر فلوسایتومتری در تحقیقات میدانی گردد. فلوسایتومتری روش بسیار سریع و قدرتمندی است که برای شناسایی ذرات (هسته سلولها) و ارزیابی خصوصیات آنها به کار میرود. از فلوسایتومتری بیشتر برای تخمین مقدار DNA ژنومی DNA C-value استفاده میشود. ذرات مورد آزمایش به صورت معلق در مایع با سرعتی حدود 5 تا 50 m s-1 از میان منفذی باریک و از مقابل پرتوی باریک از نور لیزر عبور میکنند. بدین ترتیب امکان جمعآوری اطلاعات مربوط به 5 تا 50 هزار هسته در هر ثانیه فراهم میشود. به دلیل تنوع در آناتومی و شیمی بافت در گونههای مختلف گیاهی، در فلوسایتومتری بافرهای ایزولاسیون متفاوتی استفاده میشود. بافرهای ایزولاسیون، هسته را به میزان کافی از سیتوپلاسم جدا کرده و در طول آزمایش آن را دست نخورده نگهداری کرده و از هم پاشیدگی DNA به وسیله آندونوکلئازها حمایت میکنند و سبب راحتی رنگ آمیزی DNA میشوند. علاوه براین بهدلیل استفاده از بافتهای مختلف گیاهی در روشهای جدید فلوسایتومتری استفاده از بافرهای مختلف میشوند. علاوه براین بهدلیل استفاده از بافتهای مختلف گیاهی در روشهای جدید فلوسایتومتری استفاده از بافرهای مختلف G0/G1 چرخه سلولی باشند.

کلیدواژه ها:

فلوسایتومتری ، بافر ایزولاسیون هسته سلول ، فاز ، DNA C-value ، G0/G1 ، بافتهای گیاه